基因工程

• 151、

  什么是基因组文库（genomiclibrary）？构建基因组文库，涉及哪些基本过程？它同遗传学上的基

• 152、

  常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？

• 153、

  重组DNA技术常包括哪些基本步骤？

• 154、

  常用的目的基因的获取方法有哪些？

• 155、

  解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。

• 156、

  何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识DNA序列的结构特点。

• 157、

  转化子（transformant）

• 158、

  重组子

• 159、

  基因工程所用的工具酶有（）；（）、连接酶、修饰酶四大酶类。

• 160、

  在抽提DNA中，酚的作用是（），氯仿的作用是增加比重，有助于分相。

• 161、

  加入异戊醇的作用是（），同时有助于离心后界面更清晰。

• 162、

  限制性内切酶识别序列具有（），反向重复结构特征。

• 163、

  为提高重组转化效果，对同一种酶切后载体进行（）处理。

• 164、

  DNA带（）电荷，在电场中从负极向正极移动。

• 165、

  DNA分子标记的方法有（）；（）、末端标记法、交换反应标记法四种。

• 166、

  当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是（）。

• 167、

  在制备感受态细胞时，为了提高转化率，常用冰冻的（）处理和短暂的42℃热击处理。

• 168、

  质粒有（）和松弛型两种类型，在克隆基因中常用的是松弛型，在表达研究中常用的是严紧型。

• 169、

  在沉淀DNA时，常用2倍体积的无水乙醇。若反应体系中无单价离子存在，常加入1/10体积的3MNaAc

• 170、

  杂交的时间

• 171、

  杂交液的成分是什么？

• 172、

  southern杂交

• 173、

  为什么反转录酶在聚合反应中会出错？

• 174、

  生产限制性内切酶的细菌如何保护自己的DNA不被降解？

• 175、

  按适当的顺序，列出将一种mRNA的cDNA克隆到表达载体所用到的酶有哪些？

• 176、

  试述基因工程技术的发展方向？

• 177、

  如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记？

• 178、

  以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体？

• 179、

  何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？

• 180、

  简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？

• 181、

  什么是质粒的相容性？什么是不相容群？机制是什么？

• 182、

  DNA诱变有哪些种类，各有何特点？

• 183、

  切口移位（nick translation）标记探针的主要步骤有哪些？

• 184、

  用酚/氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚/氯仿中加入少许异戊醇，原因是什么？

• 185、

  酚与氯仿联合使用的好处？

• 186、

  什么是扣除杂交？其基本原理是什么？

• 187、

  简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）

• 188、

  什么叫染色体步查？其用途如何？

• 189、

  小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

• 190、

  如何用PCR制备突变DNA分子？

• 191、

  在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变

• 192、

  什么是蓝白斑筛选？其原理是什么？

• 193、

  什么是复制子？

• 194、

  大肠杆菌作为外源基因表达系统有哪些优缺点？

• 195、

  第一个作为重组DNA载体的质粒是（）

• 196、

  第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是（）

• 197、

  用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）

• 198、

  关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，（）项不是主要原因。

• 199、

  线性质粒复制的引物来自于（）

• 200、

  某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因？

• 201、

  用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间？

• 202、

  当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施？为什么？

• 203、

  基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的？

• 204、

  基因工程操作的基本步骤是什么？

• 205、

  关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。

• 206、

  RFLP产生自（）。

• 207、

  识别10碱基序列的限制酶，大约每隔（）进行一次切割。

• 208、

  关于限制性内切核酸酶的来源及其天然存在的意义，下列哪种说法是正确的？（）

• 209、

  BamHI、XbaI、BglII的识别位点分别是：G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT，哪

• 210、

  为什么使用限制性内切核酸酶对基因组DNA进行部分酶切？（）

• 211、

  DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能？（）

• 212、

  下面哪一种不是产生星号活性的主要原因？（）

• 213、

  下面关于限制性核酸内切酶的表示方法中，正确的一项是（）。

• 214、

  说明Sanger DNA测序法的原理。

• 215、

  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？

• 216、

  Northern印迹与Southern印迹有什么不同？

• 217、

  可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？

• 218、

  什么是原位菌落杂交（Colony Hybridization）？

• 219、

  什么是斑点杂交（DotHybridization）与狭缝杂交（SlotHybridization）？

• 220、

  在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA？为什

• 221、

  怎样将一个平末端的DNA片段插入到EcoRI的限制位点中去？

• 222、

  什么是基因组文库（genomiclibrary）？它同遗传学上的基因库有什么不同？

• 223、

  采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊

• 224、

  在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（）

• 225、

  下列关于同裂酶的叙述错误的是（）

• 226、

  多数限制酶消化DNA的最佳温度是（）

• 227、

  如果一个限制酶识别长度为6bp，则其在DNA上识别6bp的切割概率为（）

• 228、

  下列关于限制酶反应的说法错误的是（）

• 229、

  II类限制酶反应中必须的阳离子是（）

• 230、

  RFLP形成的原因是（）

• 231、

  需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（）

• 232、

  限制性内切酶可特异性识别（）

• 233、

  下列与RFLP相关的一条是（）

• 234、

  限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）

• 235、

  下列因素中影响限制酶切割的有（）

• 236、

  关于II类限制酶说法正确的是（）

• 237、

  通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（）

• 238、

  下列关于II类限制酶的叙述正确的是（）

• 239、

  限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（）

• 240、

  下列关于限制酶的叙述正确的是（）

• 241、

  酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）

• 242、

  限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（）

• 243、

  如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（）

• 244、

  限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（）

• 245、

  限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。

• 246、

  II型限制酶识别位点一般长度为（）个核苷酸对。

• 247、

  个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（）。

• 248、

  限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

• 249、

  限制性内切酶通常保存在（）浓度的甘油溶液中。

• 250、

  甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在（）以下。

• 251、

  限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源（）的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

• 252、

  在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

• 253、

  如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？

• 254、

  当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

• 255、

  用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤

• 256、

  用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（）

• 257、

  在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（）

• 258、

  DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（）

• 259、

  在DNA分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（）

• 260、

  下列关于平末端连接的说法正确的是（）

• 261、

  用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身

• 262、

  分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）

• 263、

  采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（）

• 264、

  粘末端连接的优点是操作简便且（）

• 265、

  重组连接时，反应体系必须的组分有（）

• 266、

  DNA片段重组连接可用下列哪些方法（）

• 267、

  在DNA重组连接时，常采用连接头连接（linker ligation），其作用是（）

• 268、

  构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（）

• 269、

  下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（）

• 270、

  下列与DNA重组连接相关的说法正确的是（）

• 271、

  下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（）

• 272、

  如果DNA分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（）。

• 273、

  如何将一平末端的DNA片段与BamHI形成的粘末端连接？

• 274、

  什么是同聚尾连接法？具有哪些优缺点？

• 275、

  什么是接头连接法？

• 276、

  为什么用同裂酶进行体外重组效率最高？

• 277、

  大肠杆菌出现感受态的生理期是（）

• 278、

  关于感受态细胞的下列说法不正确的是（）

• 279、

  Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主

• 280、

  有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（）

• 281、

  PCR实验的特异性主要取决于（）

• 282、

  有关PCR的描述下列哪项不正确（）

• 283、

  有关PCR的描述下列哪项正确（）

• 284、

  PCR反应产物的特异性取决于（）

• 285、

  从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是（）

• 286、

  用SDS-酚来抽提DNA时，SDS的浓度是十分重要的，当SDS的浓度为0.1%时（）

• 287、

  变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是（）

• 288、

  在分离DNA时，异戊醇的作用是（）

• 289、

  什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？

• 290、

  分析影响酶切的因素。

• 291、

  试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。

• 292、

  作为基因工程载体，其应具备哪些条件？

• 293、

  质粒的不相容性及其分子机理。

• 294、

  载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？

• 295、

  如何提高克隆基因的表达水平？

• 296、

  克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？

• 297、

  启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？

• 298、

  表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？

• 299、

  外源基因导入植物的方法主要有哪些？

• 300、

  出现转基因沉默现象的可能原因分析。